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定量PCR(qPCR)是一种在PCR反应中实时监测核酸扩增产物的方法。为什么qPCR提RNA不提DNA?RNA更能反映gene的表达水平依据中心法则,细胞内的DNA序列首先被转录成RNA分子,特别是信使RNA(mRNA),随后mRNA携带遗传信息,用于指导蛋白质的合成。mRNA的丰度和多样性是衡量基因表达水平的关键指标,它们直接关联到特定基因在特定时间和条件下的活性。与蛋白质相比,RNA的水平变化能够更快地反映基因表达的动态变化,因为RNA的稳定性相对较低,其水平变化可以迅速...
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qRT-PCR(定量逆转录聚合酶链反应)和Westernblot(蛋白质印迹法)是两种常用的生物分子检测技术,它们分别用于检测mRNA和蛋白质的表达水平。虽然蛋白质是由mRNA翻译而来,但mRNA的表达水平总是与蛋白质的表达水平一致吗?做实验任何一个结果如果你验证了几遍都是一样,那么请不要怀疑自己,也许不是你做错了,试图去解释这种现象!蛋白表达和RNA水平不一致的原因有:转录后调控:mRNA在转录后可以经历多种调控过程,如剪接、编辑、降解和稳定性调控。这些过程可以影响mRNA...
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加药处理的细胞换液,需要遵循一定的操作步骤,确保实验环境的无菌以及细胞的健康生长。以下是换液的一般步骤:1换液时间:一般建议每24或者48小时换液一次。2准备新的培养基:根据细胞类型和生长需求,选择合适的培养基。确保培养基新鲜、无菌,并在使用前预热至37℃。收集旧培养基:轻轻摇晃培养瓶,使旧培养基充分混合。使用移液器将旧培养基收集到废液缸。注意不要触碰到细胞表面。3添加新培养基:将收集到的旧培养基丢弃,向培养瓶中加入新的培养基。确保新的培养基充分覆盖细胞表面,避免气泡产生,也...
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转染细胞效率低下的原因在生物医学研究中,将外源基因导入细胞以研究其功能或使细胞展现出新的特性是非常常见的实验手段。然而,转染细胞的效率低下一直是科研人员面临的一大难题。今天小编将探讨转染细胞效率低下的原因,以期为提高转染效率提供有益的思路。1.细胞类型和状态不同的细胞类型具有不同的转染效率。一些难转染的细胞,如神经元和肝细胞,通常需要更复杂的转染技术。此外,细胞的生长状态也会影响转染效率,处于对数生长期的细胞更容易接受外源基因。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在70-80%;如...
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RNA的分类1.信使RNA(mRNA)信使RNA是RNA的一种,主要功能是将DNA上的遗传信息传递到蛋白质合成机器——核糖体上,从而实现蛋白质的。信使RNA的结构简单,一般由一条单链RNA组成。mRNA的长度差异较大,哺乳动物的mRNA长度一般在5×102~1×105个核苷酸,这种长度的差异使得mRNA能够携带更多的遗传信息。在细胞中,mRNA的含量占到了总RNA的1%~5%,虽然mRNA的含量相对较少,但种类繁多,因为人体中约有2万多个基因,每个基因都会产生一种mRNA。正...
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